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  • PA317小鼠成纖維細(xì)胞

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號(hào) : TW34410
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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基本信息
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
中文名稱 :小鼠成纖維細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)稱 : PA 317
細(xì)胞形態(tài) : 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 : 貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)環(huán)境 : 空氣,95% ;CO2,5% 37℃
凍存條件 : 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40% FBS+5% D M SO液氮
完全培養(yǎng)基 : DM EM (PM 150210)+10% F B S(164210-50)+1% P /S(P B 180120)

傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液。
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄。
3、加入1ml左右0.25% 胰蛋白酶溶液(含ED TA ),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞。
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶。
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm /min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄。
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
傳代比例(密度) : 1:3-1:4
換液頻次 : 2~ 3次/周

細(xì)胞背景描述
PA 317細(xì)胞源自TK -N IH /3T3細(xì)胞,通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)D N A (pPAM 3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞,結(jié)果生成可以感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟?,可能因?yàn)橛糜跇?gòu)建PA317細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的D N A 丟失,能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA 317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03m M 次黃嘌呤、0.001m M 氨甲喋呤和0.02m M 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇,可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。選擇后,PA 317細(xì)胞應(yīng)在H T培養(yǎng)基(0.03m M 次黃嘌呤、0.02m M 胸苷)中培養(yǎng)4天,以稀釋殘留的氨甲喋呤,此后PA317細(xì)胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個(gè)月。
供體年齡 : 胚胎
組織來源 : 胚胎
細(xì)胞類型 : 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系
生物安全等級(jí) : 1
細(xì)胞保藏中心 : ATCC ;  C RL-9078EC AC C ;  89032007

收到常溫細(xì)胞后如何處理
細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟請(qǐng)參照通蔚生物細(xì)胞培養(yǎng)操作指南
1. 收到常溫細(xì)胞后,及時(shí)拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
2. 用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4. 靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片 將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5. 若觀察到異?;蛘邔?duì)細(xì)胞有疑問,請(qǐng)及時(shí)跟我們聯(lián)系;對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)??筛覀兊募夹g(shù)支持交流。