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      品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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      • 綿羊星狀病毒1型RT-PCR試劑盒

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        購買數(shù)量

        • 品牌 : 通蔚生物
        • 目錄號(hào) : TW35782
        • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
        • 保存條件 : 低溫/避光保存
        • 貨期 : 現(xiàn)貨
        • 商品庫存:100
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      • 相關(guān)產(chǎn)品
      綿羊星狀病毒1型RT-PCR試劑盒
      產(chǎn)品及特點(diǎn):
      1. 一站式,用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
      2. 根據(jù)綿羊星狀病毒1型的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
      3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
      4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
      5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
      6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
      規(guī)格及成分:

      編號(hào)

      成分

      規(guī)格

      試劑一

      5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

      200 μL(橘黃蓋)

      試劑二

      MMLV-Taq Mix

      75 μL(紅蓋

      試劑三

      超純水

      1 mL(亮黃蓋)

      試劑四

      綿羊星狀病毒1型 RT-PCR 引物混合液

      100 μL(白蓋)

      試劑五

      綿羊星狀病毒1型 RT-PCR 陽性對(duì)照(1×10E8/μL)

      50 μL(黃蓋)

      試劑六

      使用手冊(cè)

      1 份

      注:為避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供專一的DNA 片段作為陽性對(duì)照。
      運(yùn)輸及保存:
      低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對(duì)照需要跟其他成分分開放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞郑斐杉訇栃浴?/span>
      自備試劑:
      樣品 RNA。
      使用方法:
      一、樣品 DNA 的制備:
      1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 綿羊星狀病毒1型 PCR陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對(duì)照??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。制備所得成為樣品 RNA。
      2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容??梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
      二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系):
      3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽性對(duì)照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

      成份

      N+2 個(gè)

      樣品管

      RT-PCR

      陰性對(duì)照

      RT-PCR

      陽性對(duì)照

      5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

      4 μL

      4 μL

      4 μL

      綿羊星狀病毒1型 RT-PCR 引物混合液

      2 μL

      2μL

      2μL

      N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品

      12.5μL

      --

      --

      超純水

      --

      12.5μL

      --

      綿羊星狀病毒1型 RT-PCR 陽性對(duì)照的 1000倍稀釋液

      --

      --

      12.5μL

      MMLV-Taq Mix

      1.5 μL

      1.5 μL

      1.5 μL

      4.上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

      過程

      溫度

      時(shí)間

      逆轉(zhuǎn)錄

      42℃

      30 min

      預(yù)變性

      95℃

      5 min

      PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)

      95℃

      30 sec

      58℃

      30 sec

      72℃

      20 sec

      最后延伸

      72℃

      7 min

      三、電泳檢測(cè):
      5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對(duì)照無擴(kuò)增產(chǎn)物,則說明實(shí)驗(yàn)失敗,需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性,如果無則為陰性。
      四、特別提示:
      本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!