產品簡介
產品名稱 :大鼠脈絡膜血管內皮細胞
產品品牌 :通蔚生物
組織來源 :脈絡膜組織
產品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
大鼠脈絡膜血管內皮細胞分離自眼球脈絡膜組織。脈絡膜在視網膜和鞏膜之間,含有豐富血管和色素細胞,對外力沖擊的耐受性較視網膜差,當眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時,堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用,使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡膜呈暗褐色,圍繞視神經乳頭部有照膜,為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜,由纖維組織、小血管和毛細血管組成,軟而薄,棕紅色,在鞏膜和視網膜之間,續(xù)連于睫狀體后方。
脈絡膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網膜外層,其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網膜外層及玻璃體,并有遮光作用,使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護作用,對整個視覺神經有調節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方,含豐富的血管和色素細胞,有營養(yǎng)和遮光作用。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠脈絡膜血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠脈絡膜血管內皮細胞經C D 31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml) ,明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 :含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :內皮細胞樣
傳代特性 :可傳2-3代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
大鼠脈絡膜血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
大鼠脈絡膜血管內皮細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈內皮細胞樣,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。